Descriere Infectiile fungice si in special cele determinate de levuri au crescut semnificativ in ultimii ani. Levurile sunt organisme oportuniste, majoritatea saprofite, dar care pot deveni patogene in anumite conditii:
- fiziologice - nou-nascuti, pacienti in varsta, gravide;
- patologice - neoplasme, boli metabolice, imunodeficienta, HIV;
- factori legati de medicamente / tratamente: antibiotice, anticonceptionale, imunosupresoare, radiatii ionizante, interventii chirurgicale;- factori locali - afectari cutanate si ale mucoaselor.

Micologia medicala cuprinde un grup extrem de divers de organisme clasificate in levuri si fungi. Levura este o celula care se reproduce prin inmugurire, celula parentala excluzand o portiune din ea pentru a produce o fiica.

Fungii se pot imparti in:
- filamentosi - formati din filamente, numite hife, ce se intrepatrund si formeaza micelii
- dimorfi. Dimorfismul se refera la abilitatea unor fungi de a exista in doua forme: filamentoasa, ce se dezvolta in laborator la 25-30 C si levurica, in tesuturile infectate.

Decizia medicului de laborator de a izola, identifica pana la nivel de specie si testa sensibilitatea la antifungice este influentata de:
- respectarea conditiilor de prelevare si conservare;
- prelevatele din cavitati colonizate cu levuri (disbioza la pacientii sub antibioterapie cu spectru larg, diabetici);
- prelevatele de la pacientii real infectati;
- izolare din prelevatele necontaminate;
- izolarea repetata si cresterea >2+ pe mediile de cultura a aceleiasi specii din leziuni mucoase sau cutanate la un pacient imunodeprimat sau diabetic;
- virulenta si frecventa implicarii unor specii in micozele umane (Candida albicans - este levura cel mai bine reprezentata in microbiota indigena si cel mai frecvent cu semnificatie clinica; lapacientii imunodeprimati, specia mai virulenta este Candida tropicalis);
- rezistenta naturala la antifungice a anumitor specii ale unui gen (Candida lusitaniae - la Amfotericina B, Candida krusei - la fluconazol) sau rezistenta unui anumit gen (Trichosporon - la Amfotericina B).
O atentie deosebita trebuie acordata pacientilor imunodeprimati, in cazul lor orice izolat fiind considerat un potential patogen ce va fi identificat pana la nivel de specie si testat pentru sensibilitatea la antifungice.

Situsuri de izolare a levurilor si agentii etiologici
Tegument, folicul pilos, raclat unghial
- Dermatophytes, Candida spp., Malassezia, Trichosporon, Aspergillus spp., Zygomycetes, Cryptococcus neoformans
Derm, tesut subcutanat
- Coccidioides immitis, Blastomyces dermatidis, Sporothrix schenckii, Aspergilus spp.
- la pacientii cu micetoame: Nocardia spp., Streptomyces.
Tract respirator inferior
- Candida spp., Coccidioides immitis, Blastomyces dermatidis, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum
- la pacientii imunodeprimat: Aspergillus spp., Zymomycetes, Nocardia asteroides, Pneumocystis carinii
Tract respirator superior
- Candida spp, Saccharomyces
Tract gastro-intestinal
- la pacientii imunodeprimat: Candida spp., Aspergillus spp., Zygomycetes
Tract genitourinar
- Candida spp., Rhodotorula, Saccharomyces, Torulopsis
Endocard
- Candida spp.
Meninge
- Candida spp., Cryptococcus neoformans
Abces cerebral
- Candida spp., Aspergillus spp., Nocardia asteroides, Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum
Lichid cefalorahidian
- Candida spp., Histoplasma capsulatum, Cryptococcus neoformans, Coccidioides immitis
Tesut osos
- Cryptococcus neoformans, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatidis
Ochi
- Candida spp., Histoplamsa capsulatum, Aspergillus spp., Cryptococcus neoformans, Zygomycetes
Ureche
- Aspergilus spp
Sinus nazal
- Aspergillus spp., Fusarium
Plagi arse
- Aspergillus spp., Zygomycetes, Fusarium
Infectii de cateter intravenos
- Candida spp., malassezia (la nou nascut)
Infectii diseminate
- Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatidis, Coccidioides immitis
- la pacienti imunodeprimati - Candida spp., Zygomycetes, Aspergillus spp., Fusarium, Cryptococcus neoformans, Nocardia asteroides

Diagnostic de laborator
In cadrul laboratoarelor Synevo se efectueaza:

I. Examen microscopic
1. colorat Gram din proba prelevata
- furnizeaza un rezultat rapid care poate servi drept ghid pentru initierea terapiei (relevand morfologia caracteristica a organismului)
- evidentierea levurilor in absenta cresterii pe mediile de cultura ( la pacientii sub tratament antifungic;
2. pe preparat proaspat lama - lamela din cultura, in vederea diferentierii anumitor specii de Aspergillus, Fusarium, Microsporum, Trichophyton etc

II. Cultivarea probelor
- Se face pe mediul - Sabouraud Agar cu Chloramfenicol in vederea limitarii contaminarii bacteriene si optimizarii cresterii.
- Icubarea probelor - temperaturade 35-37°C favorizeaza dezvoltarea levurilor sau conversia fungilor dimorfi in levuri, in timp ce temperatura de 25-30°C este optima pentru majoritatea fungilor patogeni. Perioada de incubare este cuprinsa cel mai frecvent in intervalul de 48-72 h, in anumite cazuri perioada de urmarire prelungindu-se pana la 7 zile.

III. Identificarea culturilor si determinarea sensibilitatii la antifungice
Uzual, se face cu ajutorul unui sistem biochimic standardizat bazat pe fermentarea a 7 zaharuri si un test enzimatic.
Cu ajutorul acestui sistem se pot identifica urmatoarele specii: Candida spp., Cryptococcus spp., Trichosporon spp.,  Saccharomyces cerevisiae, Rhodotorula.
Pentru determinarea sensibilitatii la antifungice se foloseste tot un sistem standardizat, ce permite testarea urmatoarelor atifungice: Amfotericina B, Nystatin, Flucytosine, Fluconazol, Ketoconazol, Miconazol, Econazol.
Pentr tulpinile ce nu pot fi identificate utilizand sistemul mentionat anterior, se foloseste un alt sistem biochimic bazat pe fermentarea a 13 zaharuri si 3 teste enzimatice, ce permite identificarea urmatoarelor specii: Candida spp., Cryptococcus spp., Trichosporon spp., Saccharomyces cerevisiae, Geotrichum spp., Prototheca wickerhamii.
Determinarea sesnibilitatii la atifungice pentru aceste specii se face cu ajutorul unui sistem standardizat ce permite testarea la : Amfotericina B, Fluconazol, Ketoconazol, Miconazol, 5Fluorocytosine, Itraconazol.

Recomandari Recomandari pentru efectuarea culturii si identificarii fungilor:

- suspiciunea clinica a unei infectii fungice.


Pregatire pacient Nu necesita o pregatire prealabila.

Pentru cadre medicale Recoltarea si transportul probelor - reprezinta criteriul primar pentru acuratetea diagnosticului in infectiile fungice.
Deoarece majoritatea fungilor patogeni au o crestere lenta, orice intarziere in procesarea probelor poate scadea probabilitatea izolarii agentului etiologic.
Viabilitatea levurilor poate fi afectata de caldura excesiva sau de frig, fiind recomandat ca transportul probelor sa se faca la temperatura ambianta, iar procesarea lor in cel mai scurt timp (aproximativ 2 ore).
Desi aproape orice tesut sau fluid poate fi supus izolarii si identificarii fungice, cele mai frecvente specimene sunt reprezentate de: folicul pilos, tegument, raclat unghial, secretie genitala, exsudat faringian, sputa, aspirat transtraheal si lichid pleural, tesuturi din plagi, lichid cefalorahidian, sange, urina si materii fecale.

Limite si interferente Nu prezinta.